Bu cins yalnızca bir bakteri türü olan E. coli tarafından temsil edilir, ancak birçok çeşidi vardır. E. coli çeşitleri biyolojik özellikleri açısından farklılık gösterir; farklı enzim gruplarına (biyovarlar) ve farklı antijenik yapılara (serovarlar) sahip olabilirler.
Escherichia coli ilk kez 1888 yılında Escherich tarafından insan dışkısından izole edilmiş ve onun adıyla anılmıştır.
E. coli'nin doğal yaşam alanı insan bağırsağıdır. Escherichia coli normal bağırsak mikroflorasının bir temsilcisidir.
E. coli, yaşamı boyunca sindirimi destekleyen (örneğin lifleri parçalayan) enzimler üretir ve bazı vitaminleri (örneğin B vitaminleri) sentezler. Ayrıca bu bakteriler dizanteri, tifo ve toksik enfeksiyonlar gibi patojen mikroorganizmalara karşı da antagonistik etki gösterir. Kalın bağırsakta E. coli'nin yokluğu ciddi bir hastalığa - disbiyoza yol açar. Bu durumda bağırsak mikroflorasının normal bileşimi bozulur, Proteus, kok florası, mantarlar vb. gelişir.
Vücudun direnci azaldığında (açlık, aşırı çalışma vb.), Escherichia diğer organ ve dokulara nüfuz edebilir ve ciddi patolojik süreçlere neden olabilir. Dolayısıyla Escherichia'nın tipik fırsatçı mikroorganizmalar olduğunu düşünebiliriz: Normal koşullar altında saprofittirler ve koşullar değiştiğinde hastalıklara neden olurlar.
Dışkıyla atılan E. coli dış ortama girer. E. coli'nin toprakta, suda ve diğer nesnelerde tespiti dışkı kirliliğini gösterir ve E. coli miktarının belirlenmesi (koli titresi, koli indeksi) nesnenin sıhhi durumunu karakterize eder (bkz. "Sıhhi mikrobiyoloji").
Morfoloji. E. coli kısadır, ortalama 0,5-3,0 × 0,5-0,8 µm çubuklardır. Gram negatif. Çoğu durumda hareketli ve peritriktirler. Ancak E. coli'nin bazı varyantları hareketsizdir. Birçok suş bir kapsül oluşturur. Hiçbir anlaşmazlık yok.
Yetiştirme. Escherichia coli fakültatif bir anaerobdur. 37°C ve pH 7,2-7,8'deki basit besin ortamlarında iyi gelişir. İnsan ve hayvanların bağırsaklarından izole edilen E. coli suşları 43-45 °C'de gelişir ve soğukkanlı hayvanların E. coli'si bu koşullar altında üremez. Farklı kökenlere sahip E. coli'nin özelliklerindeki bu farklılık, bir nesnenin sıhhi durumunu belirlemek için kullanılır, çünkü yalnızca sıcakkanlı E. coli'nin tespiti bir sıhhi soruna işaret eder.
MPA'da E. coli, düzgün kenarlı, bulanık, hafif dışbükey nemli koloniler oluşturur. MPB'de düzgün bulanıklık verir. Kapsülü olan kültürler mukoza kolonileri şeklinde büyür.
Escherichia'yı tanımlamak için ayırıcı tanı ortamı kullanılır: Endo ve eozin metilen mavisi agar (EMB). Endo besiyerinde E. coli, metalik parlaklığa sahip olan veya olmayan kızıl-kırmızı koloniler şeklinde büyür. EMS ortamında - koyu mor koloniler şeklinde.
Enzimatik özellikler. E. coli önemli enzimatik aktiviteye sahiptir. Asit ve gaz oluşturmak için laktoz, glikoz, mannitol, maltoz, sükroz ve diğer karbonhidratları ve alkolleri parçalarlar. Lroteolitik özellikler: indol oluşturur. Jelatin parçalanmaz. Bazı biyovarlar laktoz ve sakkarozu fermente etmez (Tablo 29).
Not, kg - asit ve gaz oluşumu; + bir işaretin varlığı; - bir işaretin olmaması.
Toksijenite. Escherichia endotoksin (liggopolisakkarit) içerir.
Antijenik yapı. Escherichia, bu cinsin bakterilerinin sınıflandırılmasının temelini oluşturan mikrobiyal hücrenin antijenik yapısında farklılık gösterir. Üç tip Escherichia antijeni vardır: O-antijen (somatik), K-antijen (kapsül) ve H-antijen (kamçı). Termostabil O-antijen bir lipopolisakkarit-protein kompleksidir ve bakterilerin hücre duvarında bulunur. O-antijen, bir kültürün serolojik bir gruba ait olup olmadığını belirler. Bu tür 170'den fazla grup tanımlanmıştır. O-antijeninin bazı bileşenleri, Escherichia'nın farklı O-gruplarında ve bazen diğer enterobakterilerde (Shigella, Salmonella, vb.) ortaktır. Escherichia'nın K antijenleri farklıdır: A, B, L ve M. Antijenler A ve M termostabildir, B ve L termostabildir. K-antijeni, mikrobiyal hücrede O-antijeninden daha yüzeysel olarak bulunur ve bu nedenle, onun varlığında, canlı bir kültürün O-serum ile aglütinasyon reaksiyonu meydana gelmez. O-antijenini tespit etmek için kültür bir saat boyunca 100 ° C'de ısıtılır: ısıtma sırasında K-antijeni yok edilir ve O-antijeni serumla etkileşime girebilir hale gelir. Escherichia'nın, esas olarak B tipi antijenler (ısıya duyarlı) olmak üzere yaklaşık 100 tip K-antijenine sahip olduğu tespit edilmiştir. H-antijeni flagella ile ilişkili olduğundan yalnızca hareketli suşlarda bulunur. Escherichia'da 50'den fazla H-antijen türü bilinmektedir. H-antijeninin belirlenmesi, izole edilen kültürün serovaryantının belirlenmesini mümkün kılar (Şekil 40).
İzole edilmiş Escherichia kültürünün antijenik bileşiminin özellikleri, O-, K- ve H-antikorlarını içeren serumlarla aglütinasyon reaksiyonunun sonuçlarına dayanarak verilmiştir. Aynı zamanda kültürde hangi antijenlerin mevcut olduğu belirlenir ve bunların kombinasyonu, izole edilmiş kültürün antijenik formülünü, yani serovaryantını karakterize eder. Tablo 30'da K antijenlerinin B antijenleri olduğu bazı E. coli serovarlarının antijenik yapısının örnekleri sunulmaktadır.
Kültür, OK-serum OP1:K58 (B4) ve H-serum "6" ile aglütine edilmişse, E. coli serovaryantı O111:B4:H6 izole edilmiştir; OK-serum O26:K60 (B6) ve H-serum “11” ile aglütinasyon reaksiyonu fark edilirse, E. coli 026:B6:H11 vb. kültürü izole edilir.
E. coli'nin serovaryantının belirlenmesine ek olarak izole edilen kültürün fagovarının belirlenmesi de mümkündür. Bireysel serogrupların Escherichia'sını lize eden bakteriyofaj setleri mevcuttur. Bir kültürün parçalanmasıyla fajlardan biri kendi fagovarını oluşturur. Faj ürünlerinin tanımlanması epidemiyolojik öneme sahiptir.
E. coli'nin antagonist etkisi ve paslandırıcı ve patojenik bakterilerin büyümesini baskılama yetenekleri, disbiyoz ve çeşitli bağırsak hastalıklarının (kolibakterin, bifikol) tedavisi için bakteriyel preparatlar oluşturmak için kullanılır.
Çevresel faktörlere dayanıklılık. E. coli oldukça dirençlidir. 55°C'de bir saat içinde, 60°C'de ise 15 dakikada ölürler. Toprakta ve suda 2-3 aya kadar kalırlar, sütte hem hayatta kalırlar hem de çoğalırlar. Dezenfektan çözeltileri (%3 kloramin, 1:1000 cıva çözeltisi vb.) onları 20-30 dakika içinde öldürür. E. coli özellikle parlak yeşilin etkilerine karşı hassastır.
Hayvan duyarlılığı. Bazı serogrupların Escherichia'ları çeşitli hayvanlar için patojendir ve hayvanlarda gastrointestinal hastalıklara neden olur. Laboratuvar hayvanları arasında kobaylar, tavşanlar ve beyaz fareler E. coli'ye karşı en duyarlı olanlardır. Uygulama yöntemine bağlı olarak, E. coli kültürü çeşitli patolojik süreçlere neden olur: deri altı enjeksiyonlarla iltihaplanma ve apse, intraperitoneal ve intravenöz uygulama ile peritonit ve sepsis.
Enfeksiyon kaynakları. Hasta bir adam. Bu durumda bakteriler vücuda dış ortamdan girer (ekzojen enfeksiyon). E. coli ayrıca “içeriden” (endojen enfeksiyon) patolojik bir sürecin gelişmesine de neden olabilir.
İletim yolları. Ekzojen enfeksiyon formunun ana bulaşma yolu ev içi temastır (dolaylı temas). Patojenler kirli ellerden, bulaşıklardan, oyuncaklardan, iç çamaşırlarından, yiyeceklerden, sineklerden bulaşabilir.
Patogenez. Escherichia'nın neden olduğu hastalıklara Escherichiosis denir. Escherichiosis'in gelişimi, patojenin vücuda giriş yoluna ve patojenin ait olduğu serogruba bağlıdır. Bakteriler ağız yoluyla girdiğinde çocuklarda ve yetişkinlerde bağırsak hastalıkları ortaya çıkabilmektedir. Bazı O-grubu Escherichia (serovar), insan hastalıklarının en yaygın patojenleridir. Bu tür bakterilere enteropatojenik Escherichia coli (EPEC) adı verilir. Şu anda, farklı escherichiosis seyrine neden olan birçok ECP varyantı bilinmektedir. Birkaç ECP grubu vardır:
grup I - küçük çocuklarda kolienterite neden olan ajanlar (serogruplar O111, O26, O55, O86, vb.);
grup II - çocuklarda ve yetişkinlerde dizanteri benzeri hastalıkların etken maddeleri (O25, O124, O143, O144, vb.);
grup III - kolera benzeri hastalıkların etken maddeleri (O1, O5, O6, O78, vb.).
E. coli gıda ürünlerinde çoğalabilir. Bu tür ürünleri yemek, gıda kaynaklı toksik enfeksiyonun gelişmesine yol açar.
Endojen enfeksiyonun gelişimi çeşitli organlara zarar verir: safra kesesi iltihabı (kolesistit), mesane (sistit), kan zehirlenmesi (sepsis), vb.
Bağışıklık. Bağışıklık, bu hastalığın etken maddesi olan Escherichia'nın yalnızca bir serovaryantına karşı geliştirilir. Escherichia'nın çeşitliliği bu bağışıklığı pratikte etkisiz hale getiriyor. Hastalıklı çocuklarda bağışıklık durumunun gelişmesinde plasentadan geçmeyen ve dolayısıyla anneden bulaşmayan IgM antikorlarının oluşumu büyük önem taşımaktadır. Escherichia'ya karşı IgA antikorları anneden çocuğa anne sütü yoluyla bulaşır.
Önleme. Kişisel hijyen ve hijyen koşullarını sağlamak. Spesifik bir önleme yoktur.
Tedavi. Antibiyotikler: ampisilin, tetrasiklin vb. Şu anda kullanımı iyi sonuçlar veren koliproteus fajı üretiliyor.
Kontrol soruları
1. Bağırsak ailesindeki bakterilerin temel özellikleri nelerdir?
2. Escherichia'nın hangi antijenleri var?
3. E. coli'den hangi tıbbi preparatlar hazırlanır?
Mikrobiyolojik inceleme
Çalışmanın amacı: EPC'lerin izolasyonu ve tanımlanması.
Araştırma materyali
1. Bağırsak hareketleri.
2. Kusma.
Gerekirse burun ve boğazdan gelen akıntıyı, kulaktaki irini, kanı, idrarı, cesedin organ parçalarını inceler.
Koli-enterit salgını meydana gelirse gıda ürünleri, servis personelinin ellerindeki yıkamalar, oyuncaklar ve diğer eşyalar (epidemiyolojik belirtilere göre) incelenir.
Not. Hastalığın başlangıcından itibaren dışkı ne kadar erken incelenirse patojenin izole edilebilme olasılığı o kadar artar.
Ana araştırma yöntemi
Bakteriyolojik
Çalışmanın ilerlemesi
Çalışmanın ikinci günü
Bir gün önce tohumlanan kapları termostattan çıkarın ve gelen veya iletilen ışık altında inceleyin. Endo besiyerinde koyu kırmızı koloniler (metalik parlaklık olan veya olmayan) veya EMS besiyerinde mor koloniler varsa, EPC'yi diğer Escherichia çeşitlerinden ayırt etmek için cam üzerinde bir test aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirilir.
Bir test aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirmek için en az 10 izole edilmiş koloni seçilir ve bunlar kabın arka tarafında işaretlenir veya numaralandırılır; hedeflenen her koloninin bir kısmı bir öze ile çıkarılır ve bir damla polivalan serum veya immünoglobulin içinde aglütine edilir. Koloninin yalnızca bir kısmı test edilir, böylece pozitif aglütinasyon reaksiyonu durumunda koloninin geri kalanından saf bir kültür izole edilebilir.
Standart veya çok değerlikli Escherichia serumları (veya immünoglobulinler) endüstriyel koşullar altında hazırlanır. Polivalan Escherichia OK serumları (veya OK immünoglobulinleri), Escherichia'nın çeşitli O- ve K-antijenlerine karşı antikorlar içerir. Onların yardımıyla seçilen kültürün EPKP'ye aitliği yaklaşık olarak belirlenir. Örneğin polivalan serum O26, O55, O111, aynı isimli Escherichia kültürlerinin tanımlanmasını mümkün kılar. Serumlar etiket talimatlarına göre seyreltilir.
Laboratuvarda, her birinin seyreltmesi 1:10'dan yüksek olmayacak şekilde en fazla 5 serumu birleştirerek ayrı ayrı OK serumlarının bir karışımını hazırlayabilirsiniz.
Test aglütinasyon reaksiyonunun ayarlanması. İyice yağdan arındırılmış bir veya iki cam slayta 10 damla polivalan serum (veya immünoglobulin) uygulayın. Her damlaya amaçlanan koloninin bir kısmını ekleyin ve öğütün. Aglütinasyon reaksiyonu veren koloniler çekik agarlı test tüplerine elenir ve 18-20 saat termostatta bekletilir, 10 koloniden hiçbiri aglütinasyon reaksiyonu vermezse olumsuz cevap verilir.
Araştırmanın üçüncü günü
Mahsulleri termostattan çıkarın ve inceleyin. MPA'da enteropatojenik E. coli genellikle nemli, parlak, grimsi bir kaplama oluşturur, daha az sıklıkla bulanıktır. Eğimli bir agar üzerinde büyütülen kültür, polivalan Escherichia serumları (veya immünoglobulinler) ile bir cam aglütinasyon reaksiyonunda tekrar test edilir. İzole edilen kültür, polivalan serum (immünoglobulin) ile aglütinasyon reaksiyonu verirse, 1:5 - 1:10 oranında seyreltide her standart serum (immünoglobulin) ile ayrı ayrı aglütine edilir. Canlı kültürle aglütinasyon gösterge niteliğindedir.
Daha sonra seçilen kültürün Escherichia cinsine ait olduğunu biyolojik testler kullanarak doğrulamak gerekir. Bunu yapmak için kültür, indol ve hidrojen sülfit oluşumunu belirlemek için laktoz, glikoz, mannitol, sükroz, maltoz ve diğer şekerlerin yanı sıra et suyu veya pepton suyu içeren yarı sıvı Hiss ortamına ekilir. Bunun için bu maddelerin oluşumunu tespit eden reaktiflerle nemlendirilmiş iki indikatör kağıdı, tıpanın altındaki test tüplerine indirilir. Bir kağıt parçası indol varlığında kırmızıya döner, diğeri ise hidrojen sülfür varlığında siyaha döner.
Şekerlerin fermantasyonu sırasında ortamın reaksiyonu asidik hale gelir ve indikatörün rengi değişir. Aside ek olarak gaz da oluşursa ortamda kabarcıklar belirir. Aynı zamanda bakterilerin hareketliliği de belirlenir: yarı sıvı (%0,2) agara iğneleme yoluyla aşılanırlar. Hareketli bakteriler tüm ortamın bulanıklaşmasına neden olurken, hareketsiz bakteriler ise yalnızca iğnelendikleri zaman çoğalırlar.
İzole edilmiş kültürün nihai tanımlanması için, canlı ve ısıtılmış kültürlerle ayrıntılı bir aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirilir: canlı - K-antijenini belirlemek için, ısıtılmış - O-antijenini belirlemek için. Ayrıntılı bir aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirmek için antijen şu şekilde hazırlanır: 3-5 ml izotonik sodyum klorür çözeltisi, agar slantındaki kültürden yıkanır. Ortaya çıkan süspansiyon iki test tüpüne dökülür. Bunlardan biri 100°C'deki su banyosunda bir saat ısıtılır.
İki sıra test tüpünde ayrıntılı bir aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirilir. Her iki sıradaki serum, serum ampulünün etiketinde belirtilen titreye göre 1:50 - 1:100 (1. tüpte) oranında seyreltilir. İlk sıraya 2 damla canlı kültür, ikinci sıraya 2 damla ısıtılmış kültür ekleyin.
Test tüpleri çalkalanır ve 18-24 saat boyunca bir termostata yerleştirilir.
Araştırmanın dördüncü günü
Hiss ortamındaki değişiklikler dikkate alınır ve indol ve hidrojen sülfit oluşumu kaydedilir.
Escherichia'nın çoğu temsilcisi, karbonhidratları asit ve gaz oluşumuyla fermente eder ve indol oluşturmak için protein besin substratını parçalar.
Test tüpü aglütinasyon reaksiyonu bir büyüteç veya aglütinoskop kullanılarak kaydedilir. Canlı kültürde aglütinasyon iri tanelidir, öldürülmüş kültürde ise ince tanelidir. Serum titresinin en az yarısının serum seyreltmesinde ısıtılmış kültürle aglütinasyon gözlenirse ve canlı kültür en az 1:200 seyreltilmiş serumla aglütine edilirse reaksiyon pozitif kabul edilir. Antikorların ısıtılmış ve canlı kültürlere oranı da rol oynar. Isıtılmış bir kültürle aglütinasyonun kaydedildiği serumun seyreltilmesi, canlı bir kültürün aglütinasyonunun kaydedildiği serumun seyreltilmesini en az 2 kat aşmalıdır. Masada Şekil 31, aglütinasyon reaksiyonunun sonucu için çeşitli seçenekleri göstermektedir.
Not. Üç reaksiyon seçeneği mümkündür: 1) ısıtılmış kültür, canlı kültüre göre daha yüksek seyreltmelerde serumla aglütine edilir, reaksiyon pozitiftir; 2) canlı ve ısıtılmış kültürler eşit serum dilüsyonlarında aglütinasyon sağlar. Bu sonuç kültürde K-antijeninin bulunmadığını gösterebilir; Canlı ve ısıtılmış kültürlerin aglütinasyonuna O-antijen neden olur. Bu durumlarda aglütinasyon reaksiyonunun tekrarlanması gerekir; 3) Greta aglütinasyonunun yokluğunda yaşayan bir kültürün aglütinasyonu olumsuz bir cevap vermemizi sağlar. Açıkçası, serumdaki O-antikorlara karşılık gelen kültürde O-antijeni yoktur (Şekil 41).
Kontrol soruları
1. Escherichia'yı izole etmek için hangi materyal inceleniyor?
2. EPKP'yi ayırt etmek için hangi serumlar kullanılabilir?
3. Canlı ve ısıtılmış Escherichia kültürleriyle neden detaylı aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirilir?
1. Eğik agarlı bir test tüpüne Endo ortamı ve alt kültürü aşılanmış bir kültür içeren öğretmenden Petri kapları alın.
2. Öğretmenden eğimli agar üzerindeki EPC kültürünü alın, izotonik sodyum klorür çözeltisiyle durulayın. Yıkamanın bir kısmını 100°C'deki su banyosunda ısıtın. Serumu iki sıra test tüpünde seyreltin ve aglütinasyon reaksiyonunu yukarıda anlatıldığı gibi gerçekleştirin.
Kültür medyası
Bağırsak bakterilerinin yetiştirilmesi için Endo ve EMS diferansiyel ortamları kullanılır. Kuru toz formunda mevcuttur. Etiketteki talimatlara göre belirli miktarda kuru besiyerini tartın, uygun miktarda suda çözün, kaynatın, karıştırın ve steril Petri kaplarına dökün.
Özel hayatınızda boşluk mu var? Düzenli bir kız arkadaşın yok mu? Onlar cinsel ihtiyaçlarınızı sevimli yollarla karşılamak için her fırsatı verecek baştan çıkarıcı fahişelerdir.
Ders çalışması
Escherichia coli'nin biyolojik özellikleri
giriiş
Escherichiosis (kolibasilloz), kuşlar da dahil olmak üzere (çoğunlukla 2 haftalık olana kadar) genç çiftlik hayvanlarında görülen, aşırı ishal, şiddetli zehirlenme ve dehidrasyon belirtileri ile kendini gösteren akut bakteriyel bulaşıcı bir hastalıktır.
Enteritik, septik ve enterotoksemik formlarda ortaya çıkar. 150'den fazla tip kurulu. Evcil hayvanlarda ve insanlarda kolibasilloza neden olan ondan fazla Escherichia coli serotipi bilinmektedir.
E. coli'nin hayvanların bağırsaklarında yaşadığı genel olarak kabul edilmektedir. Kural olarak hastalığa neden olmaz.
E. coli'yi izole etmek için kullanılan materyal, hastalık durumunda dışkı, kusmuk, idrar, duodenum içeriği veya kanın yanı sıra enfeksiyon kaynağı olduğundan şüphelenilen gıda ürünleri gibi çevresel nesnelerdir (su, toprak, çeşitli nesnelerden alınan çubuklar). Materyal ayırıcı teşhis ortamına aşılanır ve ardından saf bir E. coli kültürü izole edilir. Tanımlama morfolojik, biyokimyasal ve antijenik özellikler incelenerek gerçekleştirilir. Son adım, E. coli'nin biyovarını, özellikle de serogrup ve serovarı belirlemektir.
1.Tarihsel referans
E. coli patojenite hastalığı
E. coli
(Escherichia coli bakterisi) 1885 yılında Escherich, Escherichia coli (Escherichia coli) adı verilen bir mikroorganizmayı keşfetti. Bu mikroorganizma insan ve hayvanların kalın bağırsağında kalıcı olarak yaşar. E. coli'ye ek olarak bağırsak bakteri grubu, epifitik ve fitopatojenik türlerin yanı sıra ekolojisi (kökeni) henüz belirlenmemiş türleri de içerir. E. coli grubunun bakterileri arasında Escherichia cinsi (E. coli'nin tipik bir temsilcisi), Citrobacter (Citr. coli citrovorum'un tipik bir temsilcisi), Enterobacter (Ent. aerogenes'in tipik bir temsilcisi) bulunur ve bunlar bir arada birleştirilir Enterobacteriaceae familyası ortak morfolojik ve kültürel özelliklerinden dolayı. Farklı enzimatik özellikler ve antijenik yapı ile karakterize edilirler.
Buzağılarda hastalık ilk kez 1891 yılında Danimarka'da K. Eijsen tarafından tespit edilmiştir. Uzmanlaşmış literatürde patolojinin tanımlandığı birçok eşanlamlı vardır: kolibasilloz, kolisepsis, kolienterit, koli ishal, “buzağıların beyaz ishali”, toksik dispepsi. Patolojinin küresel bir dağılımı vardır ve buna büyük kayıplar eşlik eder. Almanya'da otuzlu yaşlarındaki buzağılarda kolibasilloz görülme sıklığı %42-48'e, taylarda ise %19,7'ye ulaştı. Fransa'da bazı yıllarda bazı çiftliklerde hayvan ölümleri %40-55 arasındaydı. ABD'de buzağılarda kolibasilloza bağlı kayıpların toplam morbidite oranının %10'u olduğu tespit edilmiştir. Genç hayvanlarda farklı göstergelere sahip hastalık Avrupa, Asya vb. tüm ülkelerde görülmektedir. (Ya.E. Kolyakov, 1970).
Rusya'da hastalık tüm bölgelerde kayıtlıdır. 1946-1969 yıllarında Amur bölgesindeki çiftliklerde, yaşamın ilk gününde ölen buzağılar arasında kolibasiloz için pozitif laboratuvar bulgularının sayısı, yaşlı buzağılar arasında incelenen örnek sayısının %28,7'siydi. 2-3 gün - %34., 4-7 gün - %22,5., 8-14 gün - %19,4., 15-21 gün - %14,3. 3829 patolojik materyal örneği incelendi (Yu.P. Mozzhukhin, 1971). 1967-1970 yıllarında Primorye'de kolibasilloz için 746 inceleme yapıldı ve bunların her yıl %38 ila %55'i pozitifti (E.A. Kiryanov, 1974). Buzağılar arasında hastalığın bireysel salgınlarında ölüm oranı %46,6'ya, yıl ortalamasında ise %32'ye ulaştı. (E.A. Kiryanov, 1977, 1979). Habarovsk Bölgesi'nde 1972-1975 yıllarında işlenen 258 numune üzerinde yapılan bir çalışmada buzağılarda kolibasilloza ilişkin pozitif doğrulamaların sayısı %12,4 idi. Bu yıllarda domuz yavruları arasında hiçbir kolibasilloz vakası teşhis edilmedi (E.A. Kiryanov, M.F. Sosnin, 1978). 1972-1976'da Sakhalin'de buzağılarda kolibasilloz tanısı konulan pozitif vakaların sayısı %2,1 ile %46,2 arasında değişiyordu. (E.A. Kiryanov, V.G. Kurdyukov ve diğerleri, 1981). 1972-1976 yıllarında Amur bölgesinde 1696 nesne buzağılarda kolibasilloz açısından incelendi, yıllara göre pozitif sonuçların sıklığı %15,4-27,9, domuz yavrularında ise %17,3-35 arasında değişiyordu. 287 ceset incelendi (E.A. Kiryanov, I.F. Tyutrin, 1981). Analiz edilen yıllarda Uzak Doğu bölgesinde kolibasilloz vizonlar, kuşlar ve tavşanlar arasında da kaydedilmiştir.
2. Biyolojik özellikler
.1 Morfolojik özellikler
E.coli küçük (2 - 3 mikron uzunluğunda, 0,5 - 0,7 mikron genişliğinde) yuvarlak uçlu gram negatif çubuklardır. Ultra yapı diğer gram negatif bakterilere benzer. Smearlarda rastgele düzenlenirler, spor oluşturmazlar ve aşırı trikodurlar (flagella bakterinin çevresi boyunca uzanır). E. coli hareketlidir. Bazı suşların pili adı verilen bir mikrokapsülü vardır.
E. coli spor oluşturmaz.
2.2 Kültürel varlıklar
Escherichia'nın büyümesi için optimum sıcaklık 37°C, pH 7.2...7.4'tür, fakültatif anaerob besin ortamına karşı iddiasızdır.
Et-pepton suyuna (MPB), et-pepton agarına (MPA) ekildiğinde:
MPB'de ortamın önemli derecede bulanıklığıyla birlikte bol miktarda büyüme üretirler; tortu küçük, grimsi renktedir ve kolayca kırılır. Bir duvar halkası oluştururlar, genellikle et suyunun yüzeyinde film yoktur.
MPA'da koloniler grimsi mavi bir renk tonuyla şeffaftır ve birbirleriyle kolayca birleşir (bkz. Ek 2).
Diferansiyel besiyerine aşılama yaparken:
Endo besiyerinde koyu metalik parlaklığa (E. coli) sahip orta büyüklükte düz kırmızı koloniler oluştururlar. (bkz. Ek 3)
Levin besiyerinde E. coli, bu besiyerinde bulunan laktozu ayrıştırabildikleri için indikatörün renginde renkli koloniler üretir.
Hiss besiyerinde E. coli gaz oluşturabilir. Seçici diferansiyel besiyerinde koloniler besiyerinin rengine karşılık gelen bir renk alır.
Ploskirev'in ortamında - sırasıyla sarı renk tonuyla kırmızı veya renksiz.
kanlı agarda (BA) tam hemoliz verebilir.
2.3 Biyokimyasal özellikler
Escherichia coli çok sayıda sakkarolitik enzim üretir ve glikozu ve diğer karbonhidratları çoğunlukla asit ve gaz oluşumuyla hızla fermente eder. Escherichia coli'nin neredeyse tüm biyotipleri mannitol, arabinoz ve maltozu asit oluşumuyla sürekli olarak fermente eder; suşların %90'ından fazlası - laktoz, sorbitol; tutarsız olarak - sükroz, rafinoz, ramnoz, ksiloz, dulsit, salisin; Kural olarak adonit ve inositol fermente edilmez. E. coli amonyum sitrat ve sodyum malonat kullanmaz, potasyum siyanür üzerinde gelişmez, nitratları ve nitritleri azaltmaz, üreyi parçalamaz, jelatini sıvılaştırmaz, çoğu suş indol oluşturur ve H salmaz 2S. Escherichia coli, metilroth ile pozitif reaksiyon ve negatif Voges-Proskauer reaksiyonu verir: (Voges-Proskauer reaksiyonunu kurmak için, 2,5 cm3 bakteri kültürüne 1 cm3 %6 alkol alfa-naftol çözeltisi eklenir. Başlangıçta 0,4 cm küp %40'lık sulu KOH çözeltisi, test tüpü iyice çalkalanır ve 3-5 dakika sonra sonuçlar dikkate alınır.Kültürde asetilmetilkarbinol varsa pembeye döner - a pozitif reaksiyon, kültürün sarıya boyanması negatif reaksiyonu gösterir; şüpheli bir reaksiyon durumunda kültür açık turuncuya döner.) E. coli, sitokrom oksidaz ve fenilalanin deaminaz enzimlerini sentezlemez ve tutarsız bir şekilde lizin ve ornitini dekarboksile eder ve arginini dehidrolize eder. Sütü lorlayın.
2.4 Antijenik yapı
Antijenik ve en önemlisi toksinojenik özelliklere dayanarak E.coli'nin iki çeşidi ayırt edilir:
fırsatçı Escherichia coli;
ishale neden olan patojenik basiller.
Escherichia coli O-, K- ve H-antijenlerini içerir. O (somatik) - E. coli'deki antijenler, hücre duvarının lipopolisakaritiyle (LPS) ilişkilidir. O-antijeninin immünokimyasal özgüllüğü, diğer ucunda 2-keto-3-deoksioktonat (KDO) yoluyla lipit A'ya bağlanan polisakkarit zincirinin terminal bölümünün tekrar eden birimlerindeki heksasakkaritlerin bileşimi ile belirlenir. Örneğin, Escherichia coli suşlarından birinin LPS'sinin yapısı aşağıdaki gibi sunulmaktadır:
Aynı terminal bağlantıdaki şeker miktarı ve belirleyici bağlantıların sayısı, farklı Escherichia serogrupları arasında farklılık gösterir. E. coli O-antijenlerinin özgüllüğü genellikle bir cam slayt üzerinde O- veya OB-aglütinasyon serumları ile aglütinasyon reaksiyonuyla veya daha az sıklıkla başka yöntemlerle belirlenir.
K-antijenleri, Escherichia coli'nin kapsülü ve LPS'si ile ilişkili yüzey antijenlerini belirtir. Yüksek sıcaklığa ve kimyasal maddelere duyarlılık bakımından birbirinden farklı olan A-, B- ve L-antijenlerine ayrılırlar. Isıya karşı en yüksek direnç (2 gün boyunca 100°C'ye kadar) ½ saat), alkol ve 1 N. HCl çözeltisi A-antijenine sahiptir, L-antijeni en az stabildir. Çoğu E. coli'de K antijenleri, üronik asit içeren asidik polisakkaritlerdir. Bazı K antijenleri yalnızca protein içerir. K antijenlerine sahip E. coli, homolog O coli serumu ile aglütine edilmez. Bu özellik canlı kültürlerin doğasında vardır ve kaynatıldıktan veya otoklavlandıktan sonra kaybolur. K-antijenlerinin varlığı aynı zamanda aglütininlerin adsorpsiyon reaksiyonunda ve immünelektroforetik çalışmalarda da tespit edilmiştir.
H-flagelar veya flagellar antijenler, aktif olarak hareketli suşların karakteristiğidir. Flagellin proteini ile ilişkilidirler ve Escherichia coli'nin immünokimyasal spesifikliğinin tipini belirlerler. H antijenleri trombozlanabilir. 2½ kaynatıldığında tamamen yok olurlar. saat.
E. coli'de yaklaşık 170 O antijeni, 97 K antijeni ve 50 H antijeni tanımlanmıştır. Kirpiklerle donatılmış E. coli suşları, protein silli antijenler içerir. Hemaglutinasyon reaksiyonunda tespit edilirler.
Escherichia coli antijen formülleriyle belirtilir: O-antijen numarası birinci sıraya, K-antijen numarası ikinci sıraya ve H-antijen numarası üçüncü sıraya yerleştirilir. K antijeninin türü parantez içinde belirtilmiştir. Örneğin K(B) veya K(L). O-, K- ve H-antijenlerinin sayıları iki nokta üst üste ile ayrılmıştır. Antijenik formüller, incelenen suşun belirli bir serolojik gruba ait olup olmadığını belirler.
Epizootik kolibasilloz salgınlarına çoğunlukla aşağıdaki serogrupların patojenik Escherichia suşları neden olur:
buzağılarda - 08, 09, 015, 020, 026, 035, 078, 086, 0101, 0115, 0117, 0119, 0141, daha az sıklıkla 02, 033, 041, 055, 0103, 0127, 0137;
domuz yavrularında - 06, 026, 033, 0101, 0136, 0139, 0141, 0142, 0149, 0152, 0157;
kuzularda - 04, 08, 09, 015, 020, 028, 035, 041, 078, 0101, 0137;
kuşlarda - 01, 02, 08, 015, 018, 026,055, 078, 0111, 0113, 0128, 0141.
2.5 Plazmitler
Escherichia coli çeşitli plazmitler içerebilir: profaj, doğurganlık faktörü, kolikinojenik faktör, direnç faktörü, antijenik faktör, enterotoksijenik faktör ve diğerleri. Profajlar, Escherichia coli'nin belirli özelliklerinde değişikliklere neden olabilir, örneğin O-antijen (lizogeni (Yunanca l'den) ý sis - ayrışma, çürüme ve ... genia - köken, yaratım), bakterilerin, doğrudan enfeksiyondan sonra birkaç nesil boyunca bir bakteriyofajın salınmasıyla genetik olarak belirlenmiş lize olma yeteneği. Lizogeni teorisi, 1950 yılında Fransız bilim adamları A. Lvov ve A. Gutman tarafından geliştirildi ve lizojenik durumun, potansiyel olarak bulaşıcı bir yapının (bir profaj) bakteri hücrelerindeki varlığıyla ilişkili olduğunu gösterdi. Lizojenik bakterilerin her neslinde, hücrelerin çok küçük bir kısmı parçalanır (~milyonda 1 hücre), ve ılıman faj olarak adlandırılan 70 ila 150 parçacığın salınımı gerçekleşir. Enfeksiyöz bir duruma (profaj indüksiyonu) profaj geçiş sıklığı, bir dizi ajan (örneğin, ultraviyole ışınları) ile arttırılabilir. Bir bakteri hücresinin ılıman bir faj ile enfeksiyonundan sonra, enfeksiyon süreci iki yönden birinde gelişebilir: litik döngü yolu boyunca; bu, tıpkı bakterilerin öldürücü fajlarla enfekte olduğu zaman, hücre lizizi ve salınımıyla sona eren litik döngü boyunca. çevreye faj nesli; lizojenizasyon yolu boyunca, hücredeki biyosentetik süreçlerin bir sonucu olarak, enfekte edici faja karşı bağışıklık geliştirildiğinde, faj DNA'sı bakterinin DNA'sına dahil edilir ve daha sonra onun bileşeni (profaj) olarak onunla kopyalanır ve bakteri hayatta kalır ve lizojenik hale gelir. Hücrenin kaderi enfeksiyonun ilk aşamalarında belirlenir ve esas olarak bağışıklığın oluşma zamanına bağlıdır. Bağışıklık durumu, enfeksiyonun gelişimi geri dönüşü olmayan bir şekilde parçalanmaya yol açan bir aşamaya ulaşmadan önce ortaya çıkarsa, o zaman lizojenizasyon meydana gelebilir. Bakteriyel genom aynı anda birkaç farklı fajın (cinsiyet ve lizojeni) profajlarını içerebilir. Bu durumda hücre tüm bu fajlara karşı bağışıklık kazanır. Lizojenizasyon sonucunda bakterinin yeni genetik bilgi edinmesine bağlı olarak bakteri hücresinin bazı özelliklerinde bir değişiklik (lizojenik dönüşüm adı verilen) meydana gelebilir. Yapay olarak elde edilen lizojenik bakteriler, özellikleri bakımından doğal koşullarda bulunan lizojenik bakterilerden farklı değildir. Lizojenik hücrenin soyunun küçük bir kısmında “iyileşme” meydana gelir - profajın kaybı. Profajını kaybeden hücreler, lizojenik olmayan soylara yol açar. Bu işlemin sıklığı, örneğin ultraviyole ışınlarına maruz bırakılarak artırılabilir. Böylece lizojeni. - Bakterilerin faj tarafından enfekte olduğu andan hücrenin parçalanmasına kadar çok sayıda hücre neslinin geçtiği bakterilerde karmaşık bir viral enfeksiyon şekli).
F-plazmitleri cinsel polariteyi belirler ve cinsiyet silialarının (sex-pili) oluşumuna neden olur. Col plazmitleri, filogenetik olarak ilişkili bakterilerin büyümesini engelleyen kolisin oluşumunu kontrol eder. R plazmitleri E. coli'deki antibiyotik direncinden sorumludur. Plazmid K88, enteropatojenik ve enterotoksijenik Escherichia coli'nin yapışkan özelliklerini belirleyen aynı isimli antijenin ve ipliklerin sentezini kontrol eder; Plazmitler iki tip olabilir. Bunlardan biri termolabil, diğeri termostabil ve termostabil enterotoksinin sentezini belirler.
2.6 Toksin oluşumu
E. coli, O-antijeninin bir parçası olan LPS'ye (lipopolisakkarit) bağlı endotoksin üretir. Endotoksinin biyolojik aktivitesi, Escherichia coli'nin farklı serogruplarında farklı şekilde ifade edilir. Endotoksinin toksik özellikleri, bir lipit veya polisakaritin düşük toksisiteye sahip olması nedeniyle LPS molekülünün tamamı tarafından belirlenir. Endotoksin kan pıhtılaşma sistemini etkiler, Schwartzman fenomenine ve diğer fenomenlere neden olur ve pirojenik, adjuvan, koruyucu ve mitojenik özelliklere sahiptir. Küçük dozlarda fagositik reaksiyonu uyarır, büyük dozlarda ise inhibe eder.
Birçok E. coli sero grubu endotoksin üretir. Escherichia coli'nin bazı serogruplarının insanlarda kolera benzeri ishale neden olduğuna, diğerlerinin ise yalnızca hayvanlarda (domuz yavruları, buzağılar) neden olduğuna inanılmaktadır.
E. coli iki tür enterotoksin üretir. Isıya dayanıklı enterotoksin ancak 30 dakika kaynatıldıktan sonra etkisiz hale gelir, selofan aracılığıyla yavaş yavaş diyaliz edilir ve asidik pH değerlerinde ve trypsin ve pronaz ile işlemden sonra aktif kalır. Molekül ağırlığı 10 3-104. Antijenik özelliği yoktur. Isıya dayanıklı enterotoksin, pronaz etkisi altında 60°C'de, pH 4.0-5.0'da 30 dakika ısıtıldıktan sonra etkisiz hale getirilir ve diyalize tabi tutulmaz. Farklı serogruplar ve kolerojenler tarafından üretilen ısıya duyarlı enterotoksinlerin antijenik özgüllüğü aynıdır. Adenilat siklaz aktivitesini uyarırlar ve siklik adenozin monofosfatın (cAMP) birikmesine neden olurlar, bu da salgılamanın bozulmasına ve akut ishalin gelişmesine yol açar.
2.7 Direnç
E.coli'nin dış etkenlere karşı direnci asporojen bakteriler için yaygındır. Dış ortamda (su, toprak) belirli koşullara bağlı olarak birkaç ay boyunca hayatta kalır. Süspansiyon halinde ısıtıldığında 55°'de bir saat sonra, 60°'de 15 dakika sonra, %1 fenol çözeltisinde 10 dakika sonra, 1:1000 süblimasyon çözeltisi içinde 2 dakika sonra ölür. E. coli parlak yeşil ve tetratiyonik asit tuzlarına karşı seçici duyarlılığa sahiptir. Bu, bir dizi seçici ortamın kullanımının temelidir. E. coli'nin birçok suşu monomisin, kanamisin ve gentamisin'e karşı oldukça duyarlıdır.
2.8 Patojenite
Kalın bağırsağın komensalleri olan Escherichia coli, vücudun direncinde keskin bir düşüşle organ ve dokularda cerahatli inflamatuar süreçlere neden olabilir.
E. coli'nin virülansı, E. coli'nin yapışkanlığında, yani bağırsak epitelinin villusuna yapışmada, ince ve kalın bağırsağın lümeninde üremede, epitel hücrelerine nüfuz etmede ve hücre içi üremede kendini gösterir. makrofajların ve polimorfonükleer lökositlerin fagositik aktivitesinin baskılanmasında. Escherichia coli - genç hayvanlarda kolenteritin ve yetişkin hayvanlarda kolera benzeri hastalıkların etken maddeleri - bağırsak epitel hücrelerinin yüzeyinde çoğalır. Dizanteri benzeri hastalıkların etken maddeleri olan Escherichia coli, epitel hücrelerine nüfuz eder ve içlerinde çoğalır. E. coli'nin virülansının ortaya çıkışı bağırsağa nüfuz eden bakterinin dozuna bağlıdır. Escherichia coli'nin virülansı doku kültürlerinde, deneysel kolienterit, zatürre ve diğer süreçlerin çoğaltılması sırasında laboratuar hayvanları üzerinde yapılan deneylerde belirlenir. Penetrasyon yeteneği, bir kobay gözünün konjonktivasına bir E. coli kültürünün yerleştirilmesiyle Sheren'in keratokonjonktival testiyle belirlenir.
E.coli hayvanlara ciddi zararlar verebilir. Kalın bağırsakta yaşayan ve fırsatçı olan suşlar, gastrointestinal sistemin ötesine geçebilir ve bağışıklıkta azalma ve bunların birikmesiyle çeşitli spesifik olmayan cerahatli inflamatuar hastalıkların (sistit, kolesistit, kolisepsis ve diğerleri) nedeni haline gelebilir. Bu tür hastalıklara parenteral escherichiosis denir.
Vücuda dışarıdan giren ishal E. coli türleri enteral (salgın) escherichiosis salgınlarına neden olabilir.
Çoğu zaman, bağışıklık sistemi henüz tam olarak oluşmamış yeni doğan hayvanlar, salgın escherichiosis'ten muzdariptir; yalnızca plasenta yoluyla anneden aldıkları IgG'ye sahiptirler (ve IgM gram negatif bakterilere karşı koruma sağlar); mide suyunun asitliği düşüktür; normal mikroflora yeni oluşuyor.
Ancak ishale neden olan Escherichia, yetişkinlerin yanı sıra yaşlı hayvanları da enfekte edebilir. Ayrıca, örneğin kolera (enterotoksijenik suşlar), dizanteri (enteroinvazif suşlar), hemorajik kolit (enterohemorajik suşlar) gibi escherichiosis ortaya çıkabilir. Bazen E. coli kolisepsis, peritonit ve endotoksik (septik şok) neden olur. Ayrıca E.coli gıda kaynaklı hastalıklara da neden olabilir.
2.9 Patogenez
Bu enfeksiyonun benzersizliği, hastalığın ortaya çıkışının ve gelişiminin genç hayvanlardaki koruyucu reaksiyonların benzersizliği ile belirlenmesi ve çok daha az ölçüde etken mikrobun özelliklerine ve enfeksiyonun dozuna bağlı olmasıdır. Hastalığın patogenezinde büyük önem taşıyan, gastrointestinal sistem bezlerinin enzimatik aktivitesindeki değişiklikler, disbakteriyoz oluşumu ve bağırsak mikroflorasının antagonistik, enzimatik ve vitamin oluşturucu özelliklerinde azalmadır. kolienterit sırasında bir takım nedenlerden kaynaklanmaktadır. E. coli'nin patojenik serolojik türleri ve mikrobiyal cisimlerin çürüme ürünleri tarafından salgılanan kolitoksin ile birlikte, gıdalardan oluşan toksik ürünler, sindirim süreçlerindeki rahatsızlıklar ve bağırsak lümenindeki hareket hızı nedeniyle bağırsaktan emilir. E. coli'nin bu toksik ürünleri ve antijenleri sinir uçlarını ve doğrudan sinir merkezlerini, kan damarı ve doku duvarlarını etkiler. Toksikozun klinik belirtileri üzerinde büyük etkisi olan ikinci faktör, kılcal damarların ve küçük damarların önemli ölçüde genişlemesiyle birlikte arteriollerin keskin bir spazmının neden olduğu dolaşımdaki kan kütlesindeki bir değişikliktir. Aynı zamanda karın boşluğundaki damarların genişlemesi nedeniyle kan kütlesinin yeniden dağılımı meydana gelir, karın boşluğunda birikmesi ve beyin, deri ve böbrek damarlarında anemi oluşması meydana gelir. Artan damar geçirgenliği, proteinlerin ve kanın sıvı kısmının hücreler arası boşluklara geçmesi nedeniyle doku ödeminin ortaya çıkmasına neden olur. Kan kalınlaşmasının artması ve kan dolaşımının bozulması, sık sık meydana gelen büyük su ve tuz kayıpları ile de kolaylaştırılmaktadır. gevşek tabureler, kusma, cilt yüzeyinden buharlaşmanın artması ve nefes almayla birlikte. Bütün bunlar kan dolaşımının bozulmasına, dokulara oksijen beslemesinin bozulmasına, kalp aktivitesinde düşüşe ve idrar oluşumunun azalmasına yol açar.
Bu tür hastalarda potasyum seviyelerindeki artış kısa sürelidir ve hızlı bir şekilde idrar ve dışkıda artan potasyum kaybının arka planına karşı kan serumundaki seviyesinde ilerici bir azalma ile değiştirilir.
Toksikozun gelişen tablosunda belirli bir rol, adrenal korteksin fonksiyonunda neredeyse sürekli ve uzun vadeli bir düşüş ile vasküler tonu, protein ve karbonhidrat metabolizmasını düzenleyen ve onarmayı sağlayan glukokortikoid hormonlarının üretimi ve salgılanmasında bir azalma ile oynanır. bozulmuş hücre geçirgenliği
2.10 Ekoloji
E. coli'nin doğadaki rezervuarı, hayvan kolonunda bu mikrobun farklı biyotiplerinin bulunduğu insanlardır.
1 g dışkıdaki E.coli sayısı birkaç milyondan 1-3 milyar kişiye kadar değişmektedir. Yaşam boyunca bağırsaktaki E. coli biyovarları birçok değişikliğe uğrar. Diyet, geçirilmiş enfeksiyonlar, kemoterapi tedavisi, antibiyotikler ve diğer faktörler bu süreçte belli bir rol oynamaktadır.
3. Laboratuvar teşhisi
E. coli için morfolojik, renklendirici ve kültürel özellikler açısından tipik olan bakteriler tespit edildiğinde, biyokimyasal özellikler incelenmez, ancak hemen aglütinasyon önleyici yapışma önleyici serumlarla cam üzerinde RA'da, önce karmaşık serumlarla ve daha sonra incelenir. tek değerlikli serumlarla pozitif sonuç elde edilir. Reaksiyon sonucu bir dakika içinde dikkate alınır. Kontroller şunlardır:
) test kültürü + fizyolojik çözüm;
) kültür + 1:10 oranında seyreltilmiş normal tavşan serumu.
MPA'da yetiştirilen kültürler sera K 88, 987 R ve A 20 ile test edilir, Mink ortamından elde edilen kültürler sera K 99 ve F41 ile test edilir. RA pozitif olduğunda, kültürler escherichiosis'in etken maddeleri olarak sınıflandırılır ve ilerideki çalışmalar burada sona erer. Yapışkan antijenlere sahip Escherichia'nın yokluğunda, kültür, enzimatik özelliklerin incelenmesine dayanarak tanımlanır. E. coli, glikoz ve laktozun parçalanarak asit ve gaz oluşumu, indol salınımı, üreaz yokluğu ve sitratlardan yararlanılamaması ile karakterize edilir.
E. coli olarak tanımlanan kültürlerde O-serogrup ilişkisi, patojenitenin dolaylı bir göstergesi olarak belirlenir veya patojenite, beyaz fareler ve tavuklar üzerinde yapılan bir biyoanalizde incelenir.
Escherichia'nın O-Sero grubu aşağıdaki şekilde belirlenir. 37'de eğimli DKA'da yetiştirilen mahsuller 018...20 saat C'de bekletilir, salin solüsyonu ile yıkanır, kuru steril test tüplerine aktarılır, 100°C'de bir su banyosunda ısıtılır. 0Yüzeydeki ısıya dayanıklı L- ve B-antijenlerini yok etmek için 1 saat veya ısıya dayanıklı A-antijenini yok etmek için 120°C'de 2 saat otoklavlayın. Isıtılmış bakteri süspansiyonu 2000...3000 dakikada santrifüjlenir. -110...15 dakika sonra çökelti, RA'nın cam üzerine yerleştirilmesi için bir antijen olarak kullanılır. Antijenin geri kalan kısmı steril salinle 5 hücre konsantrasyonuna kadar seyreltilir. 108/ml ve bir test tüpü RA yerleştirin.
Kültürlerin serogrup ilişkisinin belirlenmesi, RA'nın grup polivalan serumlarla birlikte cam üzerine yerleştirilmesiyle başlar: polivalan serumlar, temiz, yağsız bir cam üzerine damla damla uygulanır. Santrifüjle çökeltilen kültür, her damlaya bir öze kullanılarak eklenir ve iyice karıştırılır, sonuç 3 dakika içinde dikkate alınır. Pozitif reaksiyon, ince taneli aglütinat oluşumu ve sıvının berraklaşması ile karakterize edilir. Sonuç negatifse düşüşün tamamı bulutlu kalır.
Polivalan grup serumlardan biri tarafından aglütine edilen antijen, 1:10 oranında seyreltilmiş monovalan serumlarla cam üzerinde RA'da incelenir ve bu polivalan serumun içerisine dahil edilir. Daha sonra pozitif reaksiyon veren monovalan serum ile 1 ml'lik hacimde test tüplerine RA yerleştirilir. Serum fizyolojik solüsyonla 1:25 oranında etikette belirtilen titreye kadar seyreltilir: önce ilk seyreltmeyi hazırlayın - 2,4 ml fizyolojik solüsyona 0,1 ml serum ekleyin, kalan test tüplerine 0,5 ml fizyolojik solüsyon dökün, 0'ı aktarın ilk seyreltmeden ikinciye 0,5 ml karışım, ikinciden üçüncüye vb. karıştırın, son test tüpünden 0,5 ml karışım, birinciden 1,5 ml çıkarılır. Tüm tüplere 0,5 ml antijen ekleyin. Aynı zamanda kontroller de ayarlanır: 1) antijen + fizyolojik çözelti (kendi kendine aglütinasyonu hariç tutmak için); 2) antijen olmadan 1:25 oranında seyreltilmiş serum (topaklanmayı dışlamak için). Tüm test tüpleri çalkalanır, 37°C'de 16...18 saat termostatta ve ardından 6...8 saat oda sıcaklığında tutulur.Bir aglütinoskop kullanarak reaksiyonu okuyun.
Sonuçlar genel kabul görmüş yönteme göre dikkate alınır ve çarpı işaretleri (++++, +++, ++, +, -) ile gösterilir.
Teşhis yöntemini hızlandırmak ve pozitif sonuçların sıklığını arttırmak için, Coons ve Kashtan yönteminin bir modifikasyonu olan ışıldayan antikor yöntemi kullanılır (Coons, Kaplan, 1950). Smear ya doğrudan dışkıdan (tuzlu su ile 5-10 kez seyreltilmiş) ya da Endo ortamında veya sıvı et suyunda 3-24 saat ön büyümeden sonra hazırlanır. Spesifik bir floresan serumla tedaviden sonra sonuç pozitifse preparat, floresan mikroskobu altında incelendiğinde bakteri hücrelerinin parlak bir parıltısını ortaya çıkarır.
4. Tedavi ve önleme
Tedavi.Tüm önlemler yaklaşık olarak salmonellozla aynı şekilde gerçekleştirilir. E. coli'ye karşı serum, her zaman kolibasiloz etken maddesinin tipine karşılık gelmemesi nedeniyle her zaman etkili değildir. En etkili etki, klortetrasiklin hidroklorürün (her biri 0.01-0.02 g), oksitetrasiklin (her biri 0.025 g) veya miserinin (1 kg canlı ağırlık başına 0.01 g) oral kullanımıyla sağlanır.
Antibiyotikler hasta hayvanları tedavi etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır (O. Z. Iskhakov ve diğerleri, 1984):
Ampisilin, İlaç tek başına veya günde 3 kez canlı ağırlığın kg'ı başına 20 mg'lık grup dozunda uygulanır;
Biovit. Antibiyotik, canlı ağırlığın kg'ı başına 0,25 g dozunda günde 2 kez yiyecek, su ve kolostrumla reçete edilir. Profilaksinin seyri 5-20 gündür;
Vitatetrin. Terapötik amaçlar için, 12 saat arayla kg canlı ağırlık başına ayrı ayrı 40 mg verin.Tedavi süresi 5-7 gündür;
Antibiyotik. Antibiyotik, 5-7 gün boyunca canlı ağırlığın kg'ı başına 1.5 mg'lık bir dozda kas içinden uygulanır;
Levomisetin. 1 kg canlı ağırlık başına 20 mg oral olarak reçete edilir;
Karışım-10. 1 ton yem başına 3-4 kg dozunda yemle birlikte verin. Tedavi süresi 7-10 gündür;
Noromandomiksin. Buzağılar için dozlar: 1 kg canlı ağırlık başına 100 mg. Antibiyotik ağız yoluyla verilir. Tedavi süresi 7 gündür;
Orimicin. Günde 2 kez, hayvan ağırlığının kg'ı başına 4-30 mg dozunda intramüsküler, subkutan, intraperitoneal veya yavaş intravenöz olarak uygulanır. Enjekte edilen çözeltinin hacmi 10-20 ml'dir. Tedavi süresi 5-7 gündür;
Polimiksin M sülfat. Günde 2-3 kez, canlı ağırlığın kg'ı başına 4 mg'lık sulu bir çözelti halinde ağızdan verin;
Solvovetin. 12 saat sonra kas içine, canlı ağırlığın kg'ı başına 0,15 ml dozunda uygulanır. Enjeksiyonlar 5-7 gün tekrarlanır;
Spectam B. Spectam, kolostrum içilmeden 20-30 dakika önce ağız yoluyla uygulanır. Doz - Hayvanın canlı ağırlığının kg'ı başına 40-60 mg, günde 2 kez, arka arkaya 3 gün.
Antibiyotiklere ek olarak, kolibasilloz için sülfa ilaçlarının kullanımı endikedir: selfapiridazin, ftazin, sülfadimetoksin, sülfamonometoksin, entero-septol, intestopan, meksaform, nevigrom, vb. (R.M. Salimov, 1985; V.A. Fortushny, 1985; V.I. Prodanov, 1974). ; V.V. Mityushin, 1985; L.I. Gershkovich, 1966; V.A. Gu-mul ve diğerleri, 1985). Son zamanlarda Lers ve Startin, kolibasillozdan muzdarip buzağıların tedavisinde yüzde 88'e varan terapötik etki sağlayarak önerildi. (N.I. Ovsyanov ve diğerleri, 1984; I.D. Kolesnichenko ve diğerleri, 1985).
Kontrol önlemleri ve önleme. Teşhis konulduğunda hasta buzağılar izole edilerek tedavi edilir. Yeni doğan buzağılara 80-100 ml hiperimmün serum ve 10 ml koliprotetan verilir. Coliprotectan iki gün boyunca 60 ml'ye kadar verilir. Çöp ve gübre her gün tesisten uzaklaştırılmaktadır. Gübre, biyotermal dezenfeksiyon için belirlenmiş bir alanda depolanır. Buzağı dispanserindeki ağıllar veya kafesler de her gün dezenfekte ediliyor. Ekipmanı, gübre kanallarını ve gübre geçişlerini dezenfekte edin.
Hasta buzağıların tutulduğu bölümde transfer kafesleri arasındaki boşluklar uzatılmaktadır. Odadaki havayı dezenfekte edin. Buzağı ahırında çalışan personele tulum ve ayakkabı temin edilmektedir. Yetkisiz kişilerin dispanser veya buzağı ahırını ziyaret etmesine izin verilmez. Kolibasillozla mücadelenin temel görevi, ineklerin beslenmesi ve barındırılması için normal koşulların yaratılmasının yanı sıra genç hayvanların yetiştirilmesini sağlamaktır. Bu bakımdan ineklerin beslenmesi biyolojik olarak tam diyetlere dayanmalıdır. Hayvanlara aktif egzersiz sağlanmalıdır. İneklerin aktif egzersizinin organizasyonu, patojenik ve ilaca dirençli plazmidlerin birikmesini önleyen güçlü bir faktör görevi görür.
Patojenik Escherichia'nın yayılmasını önlemek için sistemde eşit derecede önemli olan, buzağılamanın ve yeni doğan buzağıların yetiştirilmesinin doğru organizasyonudur. Buzağılayan inekler için her çiftlikte toplam inek sayısının %10-15'i oranında iki bölümlü analık beyazlatma alanları bulunmaktadır. Bu bölümlerin her birinde birkaç kutu inşa edilmiştir. Buzağılamadan önce ineğin derisi yıkanır ve dezenfekte edilir. Dezenfekte edilen kutu kaliteli yatak takımlarıyla doldurulur. Buzağılama temiz çuval bezi üzerinde yapılır. Doğumdan sonraki ilk saatte kolibasillozu önlemek amacıyla buzağıya 80-100 ml hiperimmün serum, ardından kolostrum verilir.
Doğan buzağıların yetiştirilmesi kutularda düzenlenir. Bu amaçla dispanser, ayrı girişleri, otonom havalandırması ve kanalizasyonu olan 4 izole bölüme ayrılmıştır. Her bölüme ayrı kafesler yerleştirilmiştir. Bölümler 3-4 günde doluyor. Bunları kullanırken “her şey boş - her şey dolu” ilkesine uyulur. 10 gün boyunca bireysel kafeslerde tutulduktan sonra dispanserden grup barınaklarına transfer ediliyorlar. Buzağı ahırındaki buzağıların bölüm bölüm bir veya iki grup kafeste barındırılmasını sağlamaya çalışırlar. Dispansere bırakılan hücre ve kesitler mekanik temizlik ve dezenfeksiyona tabi tutulur. Sonrasında bölüm beş gün boş bırakılıyor ve “biyolojik dinlenme” sağlanıyor.
Çiftlikler kolibasilozun spesifik olarak önlenmesini sağlar. Bunun için derin gebe inek ve düvelere buzağı ve kuzularda kolibasilloza karşı alüminyum hidroksit, formol-mersal aşısı yapılır. İnek ve düveler buzağılamadan 1,5-2 ay önce 10-15 gün ara ile iki kez kas içinden aşılanır. İneklerin aşılanması, doğan buzağıyı patojenik Escherichia'nın etkisinden koruyan kolostrumda yüksek konsantrasyonda antikor olmasını sağlar. Aşının ineklerde kullanılması buzağılarda kolibasilloz görülme sıklığını 1,5-3 kat, ölüm oranını ise 5-10 kat azaltır (V.V. Kolchak, 1983).
Ayrıca hastalığın önlenmesi amacıyla buzağılara normal globulin ve kolifajın yanı sıra aynı çiftlikten alınan inek kan serumunun kullanılması tavsiye edilir. Asidofil et suyu kültürü ve asidofil sütünün içilmesi olumlu bir etkiye sahiptir. Kolibakterin ve bifidumbakterin kullanımının iyi bir etkisi vardır. Bifidumbacterin, 3-4 gün boyunca günde 2-3 kez 2-3 doz G.V. Gnatenko ve arkadaşları (1983), yüksek gebeliğe sahip ineklerin streptomisin ile tedavi edilmesini önermektedir. 1 kg canlı ağırlık başına 500 ünite dozundaki ilaç, arka arkaya 3 gün boyunca günde 2 kez kas içine uygulanır. Verilerine göre tedavi gören ineklerden elde edilen buzağılarda hastalık görülme oranı %7,1'e düşüyor, ölüm olmuyor. Böyle bir tedavinin yokluğunda buzağılarda hastalık oranı %80'e ulaşır, ölüm oranı ise %61'e kadar çıkar.
Çözüm
Escherichia coli, Escherichia coli - bu ismi, bazı Rus şehirlerinde (Ivanovo, Smolensk, Chelyabinsk) son yıllardaki salgınlarla ilgili televizyon raporlarında bir kereden fazla duyduk. Mikrobiyolojiye yabancı olan bir kişi, radyo dinlediğinde veya televizyonda benzer hikayeleri izlediğinde, E. coli'nin insana ancak zarar verebileceği ve mümkün olan her yolla ondan kurtulmak gerektiği izlenimine kapılıyor.
Ancak bu mikroorganizmaya daha yakından baktığımızda, E. coli'nin insanlığa pek çok fayda sağlayabileceğini, uygun hijyen önlemleri ve uygun tedavi ile zararlı etkilerinin önemli ölçüde sınırlanabileceğini göreceğiz. Gelecekte çeşitli hastalıkları olan hastaların tedavisinde yardımcı olmak üzere tasarlanmış genetik mühendisliği ve diğer araştırmalar için çok uygun bir nesnedir.
Ülkemizde bu tür çalışmalar için finansman yetersizliği nedeniyle bu çalışmalar ABD'deki kadar aktif olarak yürütülmemektedir, ancak yakın gelecekte bu sorun aşılırsa Rus bilim adamlarının yeni tedavi yöntemlerini keşfetme şansı vardır. E. coli'nin kullanımına (burada modern bilimsel gençliğin ilgisi de dahil olmak üzere yerli bilim adamlarının muazzam coşkusu önemli bir rol oynamaktadır).
Kullanılmış literatür listesi
1. Borisov L.B. Enteropatojenik Escherichia coli ve fajları, L., 1976.
2.TSB, s. 366-368.
Gnatenko G.V., Tupia L.G. Rakitsky D.T. Buzağılarda kolibasillozla mücadelede deneyim. - Veterinerlik, Kiev: “Hasat”, 1983, sayı. 57
Gumul V.A., Afanasyev L.A., Maulanov A. 3. Buzağılarda kolibasillozun kliniği ve tedavisi. - Kazakistan tarım bilimi bülteni, 1985, No. 2.
Kaufman F. Bağırsak bakterileri ailesi, çev. İngilizceden, M., 1959.
Kiryanov E.A. Ruminantların patojenik mikroflorası. - Kitapta: Transbaikalia ve Uzak Doğu'da çiftlik hayvanlarının hastalıklarıyla mücadele. Doygunluk. ilmi Blagoveshchensk Tarım Enstitüsü Tutanakları, Blagoveshchensk, 1974.
Kiryanov E.A. Primorsky Bölgesi'ndeki kolektif çiftliklerde ve devlet çiftliklerinde buzağı hastalıkları ve bunların önlenmesi. -Vladivostok, 1977.
Kiryanov E.A., Sosnin M.F. Amur bölgesindeki sağlıklı hayvan sürülerinin salgın durumu ve sorunları. - Uzakdoğu'da çiftlik hayvanlarının verimliliğinin arttırılması. Doygunluk. ilmi tr. Primorsky Tarım Enstitüsü, sayı. 47, Ussuriysk, 1978.
Kiryanov E.A., Galiulina R.V. Genç çiftlik hayvanlarının hastalıklarının önlenmesi. -Vladivostok, 1979.
Kiryanov E.A., Tyutrin I.F. Çiftlik hayvanlarının bulaşıcı patolojileri üzerine çalışmalar. - Uzakdoğu'da yoğun hayvancılık koşullarında sürü üremesi ve veteriner sağlığı. Doygunluk. ilmi tr. Primorsky Tarım Enstitüsü, Ussuriysk, 1981.
Kolçak V.V. Amur bölgesi çiftliklerinde buzağıların kolibasillozu ve bununla mücadeleye yönelik önlemler (yöntem, öneriler). - Novosibirsk: SO VASKHNIL, 1983,
Kolyakov I - E-, Gitelson S.S., Kavruk L.S. Buzağıların kolibasillozu. - M: “Başak”, 1970.
Luria S., Darnell J., Genel Viroloji, çev. İngilizce'den, M., 1970; Ravin V.K., Lysogenia, M., 1971.
Tıbbi mikrobiyoloji, viroloji ve immünoloji, ed. 1 POUND = 0.45 KG. Borisov ve A.M. Smirnova, s. 269-273, M., Tıp, 1994.
Tıp Ansiklopedisi, sayfa 252.
Çevresel nesnelerin sıhhi-mikrobiyolojik araştırma yöntemleri, ed. G.I. Sidorenko, M., 1978.
Mikrobiyoloji ve immünoloji, ed. A.A. Vorobyova, s. 289-293, M., Tıp, 1999.
Minkevich I.E. Sıhhi gösterge mikroorganizmaları olarak Escherichia coli grubunun bakterileri, L., 1949.
Mozhukhin Yu.P. Amur bölgesindeki buzağı ve domuz yavrularında kolibasillozun epizootolojisinde. - Kitapta: XIX bilimsel konferansının materyalleri. Blagoveşçensk, 1971
Ovsyanov N.I., Ovladeva M., A., Naumova K.N. Buzağılarda ishal için Lers ilacı. - Sibirya ülkesi, Uzak Doğu, 1984, No. 2
Akut bağırsak enfeksiyonları, ed. TELEVİZYON. Peradze, s. 73, L., 1973.
Pozdeev Tamam. Tıbbi mikrobiyoloji, s. 351-357, M., Geotar-med, 2002.
Prodanov V.I. Yeni doğan buzağıların gastrointestinal hastalıklarının incelenmesi için materyaller. - Kitapta: Genç çiftlik hayvanlarının hastalıklarının önlenmesi ve tedavisi. M.: "Başak", 1974
Salimov R.M. Kolibasilloz için ilaçlar
teriyoz. - Sibirya ülkesi, Uzak Doğu, 1985. Tabachnik A.L., Girshovich E.S., Temper R.M. Enterotoksijenik E.coli, J. mikro., epid. ve immün., No. 3, s. 31, 1977.
Fortushny V.A. Buzağılarda kolibasilloz için sulfagin. - Veterinerlik, 1985, Sayı 9
özel ders
Bir konuyu incelemek için yardıma mı ihtiyacınız var?
Uzmanlarımız ilginizi çeken konularda tavsiyelerde bulunacak veya özel ders hizmetleri sağlayacaktır.
Başvurunuzu gönderin Konsültasyon alma olasılığını öğrenmek için hemen konuyu belirtin.
STYLAB, mikrobiyolojik yöntemler, gerçek zamanlı PCR ve lateks aglütinasyonu kullanarak gıda ve çevre numunelerinde Escherichia coli'nin (E. coli) belirlenmesine yönelik test sistemleri sunmaktadır.
Escherichia coli ( Escherichia coli) insanlar da dahil olmak üzere çoğu sıcak kanlı hayvanın normal bağırsak mikroflorasının bir parçası olan fakültatif anaerobik gram negatif hareketli çubuk şeklinde bir bakteridir. E. coli'nin pek çok serotipi vardır ve bunların çoğu konakçıya zararsızdır, hatta faydalıdır. Mikroflorayı oluşturan bakteriler, patojenik olanlar da dahil olmak üzere diğer bakterilerin çoğalmasını engeller. Ayrıca E. coli K vitamini de üretir. Ancak bazı serotipler e. koli ciddi hastalıklara neden olabilir. Morfolojik olarak zararsız ve patojenik E. coli farklılık göstermez, bu nedenle bir mikroorganizmanın patojenitesini belirlemek için antijenlerini analiz etmek gerekir.
E. coli bakterileri farklı serogruplara ait olabilir ve farklı antijenlere sahip olabilir. Bir serogrup, ortak bir antijeni paylaşan bir bakteri grubudur; birden fazla serotip, tür veya cins içerebilir. İçin e. koli en iyi bilinenleri enteropatojenik E. coli serogrupları O26, O55, O86, O111, O114, O119, O125, O126, O127, O128, O142 ve O158'dir. Aynı gruplar diğer patojenik E. coli türlerini de içerebilir. Örneğin O86, O127, O142 ve O158 serogrupları DAEC'de tanımlanmıştır.
Altı tip patojenik E. coli vardır.
- Enterohemorajik Escherichia coli (EHEC, aynı zamanda Shiga toksini üreten E. coli için STEC ve verotoksin üreten E. Coli için VTEC olarak da kısaltılmıştır). Bu bakteriler adı verilen iki toksin veya Shiga benzeri (Shigella benzeri) toksinler üretir. EHEC dizanteriye benzer semptomları olan ve hemorajik ishalin eşlik ettiği hastalıklara neden olur. Ağır vakalarda hemolitik üremik sendrom (HUS) gelişebilir. EHEC, Escherichia coli serotipleri O104:H4, O157:H7 ve diğerlerini içerir.
- Enterotoksijenik Escherichia coli (ETEC), ısıya dayanıklı ve ısıya dayanıklı toksinler üretir; bunlardan ikincisi Vibrio cholerae toksinine benzer. Bu bakterinin neden olduğu hastalıklar sulu ishal, ateş ve bazı durumlarda mide bulantısı ile karakterizedir.
- Enteroinvaziv Escherichia coli (EIEC), basilli dizanteriye benzer hastalıklara neden olur. Bu bakteriler bağırsak epitel hücrelerine nüfuz eder ve içlerinde çoğalır.
- Enteropatojenik Escherichia coli (EPEC), çocuklarda yetişkinlere göre daha sık ishale neden olur. Etki mekanizması ETEC ve EIEC'den farklıdır: bu bakteriler bağırsak epitel hücrelerine bağlanır ancak onlara nüfuz etmez. EPEC'in neden olduğu hastalıklar 2 haftaya kadar sürebilir.
- Enteroagregatif Escherichia coli (EAEC) de özellikle çocuklarda hastalığa neden olur. Bakteriler bağırsak epiteline yapışır ve toksinleri serbest bırakır.
- Yaygın olarak yapışan Escherichia coli (DAEC), özellikle 2 yaşın altındaki çocuklarda hafif ishale neden olur. Ancak bu mikroorganizma sağlıklı yetişkinlerin yanı sıra sağlıklı çocuklarda da bulundu.
E. coli sadece enterit ve toksik enfeksiyonlara değil aynı zamanda yenidoğanlarda menenjite, solunum yolu enfeksiyonlarına, idrar yolu enfeksiyonlarına ve bakteriyemiye (kana giren bakterilerin vücutta neden olduğu genel bir hasar) da neden olabilir.
e. koliüzerinde en çok çalışılan organizmalardan biridir. Bu bakterilerin bir suşunun genomu 1997 yılında tamamen dizilendi. Escherichia coli, genetik ve mikrobiyolojik deneylerin yanı sıra türleşme çalışmalarında da kullanılır. Ayrıca bu bakterilerin yardımıyla çeşitli proteinler sentezlenir, özellikle insan insülininin bir analoğu, bazı enzimler vb. Ayrıca aşı üretiminde de kullanılırlar. E. coli'nin yakıt üretiminde kullanımına ilişkin araştırmalar sürüyor.
Rusya Federasyonu ve Gümrük Birliği ülkelerinde, gıda ürünlerindeki E. coli içeriği TR CU 021/2011 “Gıda ürünlerinin güvenliği hakkında”, TR CU 033/2013 “Sütün güvenliği hakkında ve Süt ürünleri” ve diğer teknik düzenlemeler. Güncel mevzuat bilgilerine web sitesinden ulaşılabilir. kompakt24. iletişim .
Örneklerde E. coli'yi belirlemek için hem mikrobiyolojik yöntemler (seçici besiyeri, test substratları) hem de PCR kullanılarak DNA tespiti kullanılır. Hızlı bir test olarak basit ve hızlı bir lateks aglütinasyon yöntemi kullanılır.
Edebiyat
- TAMAM. Pozdeev. Tıbbi mikrobiyoloji. Moskova, GEOTAR-MED, 2001.
- Resmi CDC web sitesi.
- Germani Y, Bégaud E, Duval P, Le Bouguénec C. Yeni Kaledonya'da ishalli çocuklardan elde edilen izolatlar arasında enteropatojenik, enteroagregatif ve yaygın olarak yapışık Escherichia coli'nin yaygınlığı. J Enfekte Dis. 1996 Kasım;174(5):1124-6.
- Mansan-Almeida R, Pereira AL, Giugliano LG. Çocuklardan ve yetişkinlerden izole edilen yaygın olarak yapışan Escherichia coli suşları iki farklı popülasyon oluşturur. BMC Mikrobiyol. 2013 1 Şubat;13:22.
- Isabel C.A. Scaletsky, Sandra H. Fabbricotti, Rozane L.B. Carvalho, Claudia R. Nunes, Helcio S. Maranhão, Mauro B. Morais ve Ulysses Fagundes-Neto Yaygın Olarak Bağlı Escherichia coli Kuzeydoğu Brezilya'daki Küçük Çocuklarda Akut İshalin Nedeni Olarak: Bir Vaka Kontrol Çalışması. J Clin Microbiol. 2002 Şubat; 40(2): 645-648.
Escherichia (Escherichia coli)
Keşif tarihi.
Bunlar ilk olarak bir çocuğun bağırsaklarından izole edilmiş ve 1885 Alman çocuk doktoru Theodor Escherich.
|
Taksonomi. Aile |
Enterobakteriler |
|
Kabile |
|
|
çeşitler |
E. coli ve diğerleri, toplam 5 tür |
Morfoloji ve tentürel özellikler .
E. coli gram-negatif, yuvarlak uçlu düz çubuklardır, 0,4-0,-2-6 µm boyutunda, rastgele yayma şeklinde düzenlenmiş, hareketli (peritriköz), mikrokapsüllü, tip I ve II pililidir, spor oluşturmaz .
Kültürel varlıklar .
E.coli fakültatif anaeroblar, kemoorganoheterotroflardır. Yetiştirme koşullarını talep etmiyor. Optimal yetiştirme koşulları: sıcaklık 37 C, pH 7,2-7,5, yetiştirme süresi - 24-48 saat. Basit besin ortamlarında (MPB, MPA) iyi büyürler. MPB'de büyüme, yaygın bulanıklık ve ardından tortu oluşumu şeklinde gözlenir. MPA'da S şeklinde koloniler oluştururlar: pürüzsüz kenarlı ve orta büyüklükte pürüzsüz, parlak bir yüzeye sahip, hafif dışbükey yarı saydam koloniler. R-formunda büyüme mümkündür (pürüzlü kenarlı koloniler, pürüzlü bir yüzey), bazen mukoza kolonileri büyür (M-form).
Ayırıcı tanı ortamlarında karakteristik büyüme sağlarlar: Endo (metalik parlaklığa sahip koyu kırmızı koloniler); Levin (metalik parlaklığa sahip koyu mavi koloniler), Ploskirev (metalik parlaklığa sahip pembe koloniler), Ressel ve Olkenitsky. Kanlı agar hemolize neden olabilir.
Biyokimyasal özellikler .
E. coli yüksek enzimatik aktiviteye sahiptir. Katalaz pozitif ve oksidaz negatif. Voges-Proskauer reaksiyonu negatiftir. Şekerleri (glikoz, laktoz, mannitol, arabinoz, sakkaroz vb.) asit ve gaza ayrıştırırlar. Laktozun asit ve gaza ayrışması, Escherichia'yı diğer enterobakterilerden ayırt edici bir özelliktir. Nitratları nitritlere indirgerler, indol ve amonyak oluştururlar, hidrojen sülfit üretmezler ve jelatini sıvılaştırmazlar.
Antijenik yapı .
Antijenik yapı karmaşıktır. O-, H-, K- (L, B, A), M-antijenleri, fimbriyal, ribozomal ve diğer birçok antijen vardır. Seroidentifikasyonda O-, H- ve K-antijenleri büyük önem taşır.
* O - somatik antijen, hücre duvarı lipopolisakkarit, ısıya dayanıklı, alkole dayanıklı, grup (?171 serogrup).
* H - flagellar antijen, flagellin proteini, tipik (57'den fazla serotip).
* K - kapsüler antijen, asidik polisakkarit, ayrıca tipik (97'den fazla serotip). K-antijeni homojen değildir - sıcaklığa direncine bağlı olarak 3 çeşit ayırt edilir:
L - termolabil antijen (60°C'ye ısıtıldığında yok edilir);
A - ısıya dayanıklı (2-3 saatlik kaynamaya dayanıklıdır);
B, A ve L arasındaki ısıl stabilite açısından orta düzeydedir (bir saat boyunca 60°C'ye kadar ısıtmaya dayanır, ancak kaynatılarak yok edilir).
Escherichia serovarları antijenik formül belirtilerek belirlenir: O26: K60: H2...
Patojenite faktörleri.
1. Toksinler:
* endotoksin - insan vücudu üzerinde pirojenik ve toksik (kan basıncını düşürücü, nörotoksisite) etkiye sahiptir, fagositozu bastırır;
* ekzotoksinler bazı E. coli suşları tarafından üretilir:
Enterotoskin (ETKP);
Hemolitik ve nekrotik etkileri olan sitotoksin (EIC, EHEC).
2. Hücrenin yapısal ve kimyasal bileşenleri:
* pili I (yapışma) ve II (konjugasyon) türleri;
* hücre duvarının kapsülü ve T-proteini (yapışma, fagositozun baskılanması);
* plazmitler (E. coli'de Col-, R-, F-, Hly-, Ent-plazmitlerin yanı sıra yapışma faktörlerinin sentezini kodlayan plazmidler bulundu).
Rezistans.
E. coli dış ortamda iyi bir hayatta kalma oranına sahiptir ve toprakta ve suda birkaç ay boyunca varlığını sürdürür. 56C'de 1 saat içinde ölürler, 60C'ye ısıtma 15-20 dakikadan fazla sürdürülmez ve kaynatıldığında anında ölürler. Dezenfektanlara ve antibiyotiklere karşı hassastır.
Ekoloji ve patolojideki rolü.
Fırsatçı ve ishal yapıcı olanlar vare. İlezeytin.
Fırsatçı E. coli insanların, memelilerin, kuşların, sürüngenlerin ve balıkların bağırsak mikroflorasının bir parçasıdır. E. coli dışkı yoluyla çevreye salınır. Escherichia coli bir sıhhi gösterge mikroorganizmasıdır; tespiti çevresel nesnelerin taze dışkı ile kontaminasyonunu gösterir.
Fırsatçı E. coli, genellikle IDS'in arka planında, sepsise kadar çeşitli lokalizasyonlarda (idrar yolu enfeksiyonları, yara iltihabı, kolesistit, apandisit, peritonit, konjonktivit, otit, zatürre, menenjit...) endojen pürülan-inflamatuar süreçlere neden olur.
İshal yapan E. coli, ekzojen enfeksiyonların - escherichiosis (enterit ve enterokolit olarak ortaya çıkan akut bağırsak hastalıkları) ve gıda zehirlenmesinin etken maddeleridir.
Epidemiyoloji
.
Neden olduğu hastalıklar
E. coli her yerde yaygındır.
Enfeksiyon kaynağı : hastalar ve bakteri taşıyıcıları.
İletim mekanizması : fekal-oral (yollar: yiyecek, evle temas ve daha az sıklıkla su).
Patogenez ve klinik belirtiler .
İshale neden olan Escherichia coli serovarları 5 gruba ayrılır:
* Enteropatojenik (EPKP);
* Enterotoksijenik (ETKP);
* Enteroinvaziv (EICP);
* Enterohemorajik (EHEC);
* Entero-hesif (EACP).
Yukarıdakilere ek olarak, yaygın olarak yapışan Escherichia coli izole edilmiştir (henüz yeterince araştırılmamıştır).
Morfolojik olarak farklı grupların temsilcileri birbirinden ayırt edilemez; onlar tarafından farklılaştırılırlar antijenik Yapı ve patojenite faktörleri.
EPKP - 1 yaşın altındaki çocuklarda (daha sıklıkla biberonla beslenen çocuklarda) escherichiosis'e neden olur. Patojenler ince bağırsağın epitelini etkiler: dış zarın proteini (intimin) nedeniyle enterositlerin yüzeyine adsorbe edilirler, burada çoğalırlar ve mikrovilluslara zarar vererek reddedilmelerine neden olurlar. Gelişen inflamatuar reaksiyon, E. coli yok edildiğinde salınan endotoskin'in etkisinden kaynaklanır. Ana klinik belirtiler: ishal, kusma, yiyeceklerin kusması, dehidrasyon belirtileri, yetersiz beslenme. Hastalığın seyri ağırdır ve haftalarca sürebilir.
ETS çocuklarda ve yetişkinlerde kolera benzeri hastalıklara neden olur. Pilus yardımıyla ince bağırsağın alt kısımlarındaki epitelyuma tutunurlar, CF (kolonizasyon faktörü) sayesinde çoğalırlar ve 2 tip toksin üretirler: LT (ısıya duyarlı, etki mekanizması Vibrio cholerae ekzotoksinine benzer) ve ST (termostatik). LT ve ST, epitelyal hücrelerde sırasıyla cAMP ve cGMP içeriğini arttırır, bu da moleküler demirin taşınmasında bir bozulmaya ve hücrelerden su salınımının artmasına neden olur. Bu, bağırsaklardaki su-tuz dengesini bozar ve sulu ishalin gelişmesine yol açar. Hastalığın doğası hafif bir kolera biçimine benzemektedir (literatürde buna genellikle gezgin ishali denir).
EICP çocuklarda ve yetişkinlerde dizanteri benzeri bir hastalığa neden olur. Kolonun alt kısımlarındaki epitel hücrelerine adsorbe edilirler, hücrelere nüfuz ederler, çoğalırlar, Shigella benzeri toksin salgılarlar ve hücreleri yok ederler. Hücreler arası boşluklara yayılarak komşu hücreleri etkileyerek ülser oluştururlar. Klinik belirtiler: önce sulu ishal, ardından dışkıda mukus ve kan karışımı belirir.
EHEC, esas olarak çocukları etkileyen hemorajik ishal ve hemolitik üremik sendromun etken maddesidir. Patojenler, bağırsakların ve böbreklerin vasküler endotelinin (ribozomlardaki protein sentezini bloke ederek) tahrip olmasına neden olan ve iskemi ve hücre nekrozuna neden olan Shigel benzeri bir sitotoksin salgılar. Klinik olarak şiddetli ve sıklıkla ölümcül olan hemorajik kolit (kanlı ishal) ve hemolitik üremik sendrom (hemolitik anemi ve böbrek yetmezliği) görülür.
EAC (1985'te açıklanmıştır) hücrelerin yüzeyine hızlı bir şekilde yapışabilir ve bağırsağın farklı kısımlarını kolonize edebilir, ancak çoğunlukla kolonu etkiler. Sitotoksin oluşturmazlar ve hücrelere nüfuz etmezler. Klinik olarak hastalık kalıcı ishal sendromu ile karakterizedir.
Bağışıklık .
Escherichiosis transferinden sonra humoral tipe özgü bağışıklık oluşur ve lokal bağışıklık (SIgA) gelişimi gözlenir. Oluşan antikorların koruyucu özelliği yoktur.
Yaşamın ilk yılındaki çocuklarda pasif transplasental bağışıklık, plasentadan geçen antikorlar ve anne sütünden gelen antikorlar tarafından sağlanır. Ayrıca, escherichiosis'in etken maddelerinin antagonistleri olan lakto ve bifidobakterilerin çoğalmasını teşvik eden mukopolisakkaritler insan sütüyle bulaşır.
Mikrobiyolojik teşhis .
Test materyali: bağırsak escherichiosis için - bebeklerde dışkı, kusmuk, boğaz sürüntüleri, endojen enfeksiyon için - ilgili odak noktasından materyal (idrar, yara akıntısı, kan...).
1. Bakteriyoskopik yöntem.
2. Bakteriyolojik yöntem (ana) - patojenin saf kültürünün izolasyonu, tanımlanması, antibiyotiklere duyarlılığın belirlenmesi.
3. Serolojik yöntem:
* Poli-(OB) ve tek değerlikli aglütinasyon yapan Escherichia seralarına sahip RA;
4. Moleküler biyolojik yöntem (PCR, DNA probları).
Spesifik önleme geliştirilmemiştir .
Spesifik olmayan önleme : Erken tanı, hastaların izolasyonu, çocuk bakım kurumları ve sağlık kuruluşlarında çalışanların düzenli önleyici muayeneleri. Bu kurumlarda sıhhi ve epidemiyolojik düzenlemelere sıkı sıkıya bağlı kalmak büyük önem taşımaktadır.
Terapinin ilkeleri : diyet, CTP (nitrofuranlar, florokinolonlar), genelleştirilmiş formlar için - duyarlılığı dikkate alan antibiyotikler, spesifik tedavi - koli-bakteriyofaj, lakto ve bifido içeren probiyotikler.
61. Patojenik Escherichia (Escherichiosis'in etken maddeleri): taksonomi, morfoloji, kültürel ve renksel özellikler, biyokimyasal özellikler, antijenik yapı ve toksin oluşumu, patogenez ve klinik. İshalli Escherichia, fırsatçı olanlardan farklılığı. Mikrobiyolojik teşhis. Önleme ve tedavi.
Cins Escherichia.
Escherichia, belirli koşullar altında hem bağırsak (ishal) hem de bağırsak dışı (bakteriyemi, idrar yolu enfeksiyonları vb.) lokalizasyonlu geniş bir insan hastalıkları grubuna neden olabilen en yaygın aerobik bağırsak bakterisidir. Ana tür, enterobakterilerin neden olduğu bulaşıcı hastalıkların en yaygın etken maddesi olan E. coli'dir (Escherichia coli). Bu patojen, özellikle sudaki dışkı kirliliğinin bir göstergesidir. If - titre ve if - indeksi sıklıkla sıhhi göstergeler olarak kullanıldı. Escherichia, memelilerin, kuşların, sürüngenlerin ve balıkların kalın bağırsaklarının mikroflorasının bir parçasıdır.
Kültürel özellikler. E. coli sıvı besiyerinde yaygın bulanıklık üretir, katı besiyerinde ise S ve R şeklinde koloniler oluşturur. Escherichia'nın ana besiyeri olan Endo'da, laktozu fermente eden E. coli metalik parlaklığa sahip yoğun kırmızı koloniler oluşturur, fermente olmayanlar daha koyu merkezli soluk pembe veya renksiz koloniler oluşturur, Ploskirev besiyerinde sarımsı bir renk tonuyla kırmızıdır; Levin'in ortamında metalik parlaklığa sahip koyu mavidirler.
Biyokimyasal özellikler. Çoğu durumda, E. coli karbonhidratları (glikoz, laktoz, mannitol, arabinoz, galaktoz vb.) asit ve gaz oluşumuyla fermente eder, indol üretir, ancak hidrojen sülfür oluşturmaz ve jelatini sıvılaştırmaz.
Antijenik yapı. Patojenik ve patojenik olmayan Escherichia coli arasında önemli bir morfolojik farklılık bulunmadı. Farklılaşmaları antijenik özelliklerin incelenmesine dayanmaktadır. Yüzey antijenleri arasında polisakkarit O-antijenleri, flagellar H-antijenleri ve kapsüler polisakkarit K-antijenleri ayırt edilir. O-antijenlerinin (bu, belirli bir serogruba ait patojene karşılık gelir) ve 57 - H-antijenlerinin (bir serovara ait) 170'den fazla çeşidi bilinmektedir. İshale neden olan (ishal yapan) Escherichia coli 43 O grubu ve 57 OH varyantı içerir.
İshalli E.coli'nin ana patojenite faktörleri.
1. Pilus, fimbriyal yapılar ve dış membran proteinleriyle ilişkili yapışma, kolonizasyon ve istila faktörleri. Plazmit genleri tarafından kodlanırlar ve alt ince bağırsağın kolonizasyonunu teşvik ederler.
2. Ekzotoksinler: sitoninler (bağırsak hücreleri tarafından sıvının aşırı salgılanmasını uyarır, su-tuz metabolizmasını bozar ve ishal gelişimini teşvik eder) ve enterositotoksinler (bağırsak duvarı ve kılcal endotel hücrelerine etki eder).
3. Endotoksin (lipopolisakkarit).
Çeşitli patojenite faktörlerinin varlığına bağlı olarak ishal yapan E. coli beş ana türe ayrılır: enterotoksijenik, enteroinvaziv, enteropatojenik, enterohemorajik, entero-hesif.
4. Patojenik E. coli bakteriyosin (kolisin) üretimi ile karakterize edilir.
Enterotoksijenik E.coli, koleraya benzer etki gösteren, yüksek moleküllü, ısıya dayanıklı bir toksine sahiptir ve kolera benzeri ishale (küçük çocuklarda mide iltihabı, seyahat ishali, vb.) neden olur.
Enteroinvazif Escherichia coli bağırsak epitel hücrelerine nüfuz edebilir ve çoğalabilir. Dışkıda kanla ve çok sayıda lökositle (istilacı bir sürecin göstergesi) karışan aşırı ishale neden olurlar. Klinik olarak dizanteriye benzer. Suşların Shigella ile bazı benzerlikleri vardır (sabittir, laktozu fermente etmez ve yüksek enteroinvazif özelliklere sahiptir).
Enteropatojenik E.coli çocuklarda ishalin ana etkenidir. Lezyonlar, bakterilerin mikrovilluslara zarar vererek bağırsak epiteline yapışmasına dayanmaktadır. Sulu ishal ve şiddetli dehidrasyon ile karakterizedir.
Enterohemorajik E. coli, kanla karışık ishale (hemorajik kolit), hemolitik-üremik sendroma (böbrek yetmezliği ile birlikte hemolitik anemi) neden olur. Enterohemorajik Escherichia coli'nin en yaygın serotipi O157:H7'dir.
Enteroadezif E. coli sitotoksin üretmez ve yeterince araştırılmamıştır.
Epidemiyoloji. İshalli E. coli'nin ana yayılma mekanizması fekal-oraldır. Enfeksiyon yiyecek, su ve hayvanların bakımı sırasında meydana gelebilir. Escherichia birçok hayvan türünün bağırsaklarında yaşadığından enfeksiyonun spesifik kaynağını belirlemek zordur. Enfeksiyonun temas yolu kapalı işletmelerde olabilir. Enteropatojenik ve enteroinvaziv E. coli, nozokomiyal escherichiosis salgınlarının en yaygın nedenleridir.
Laboratuvar teşhisi. Ana yaklaşım, saf bir kültürün ayırıcı tanı ortamında izolasyonu ve antijenik özelliklerine göre tanımlanmasıdır. RA, bir dizi çok değerlikli OK (O- ve K-antijenlerine) serumla yerleştirilir, daha sonra O-sera adsorbe edilir ve kültürler (K-antijenlerini yok etmek için) 100 santigrat derecede ısıtılır.
Biyokimyasal farklılaşma ek önem taşımaktadır. İshalli tiplerin tanımlanması spesifik belirteçlerin (enterohemorajik E. coli sorbitol fermente etmez ve serovar O157:H7 beta-glukuronidaz aktivitesi sergilemez) tanımlanmasıyla mümkündür.